Стволовите клетки, открити в панкреаса

• Хипогликемия

Досега се смяташе, че не съществуват прогениторни клетки на панкреаса и повечето изследователи са изоставили търсенето си. Въпреки това, през януари 2008 г. резултатите от доклада бяха публикувани в списание Cell, в което ясно е показано, че панкреатичната тъкан съдържа стволови клетки, способни да се диференцират в бета-клетките, произвеждащи инсулин. Изследването е проведено върху мишки и ако резултатите му са потвърдени за хората, описаният клетъчен тип може да се превърне в незаменим инструмент за лечение на диабет.

"Една от най-интересните характеристики на тези възрастни стволови клетки е, че те са почти неразличими от ембрионалните стволови клетки на предшественика на панкреаса", казва Хари Хаймберг от Университета Врие (Белгия, Брюксел). „Не открихме значителни разлики от ембрионалните клетки, като изследвахме тяхната морфология и модел на генната експресия. В културата те се държат по същия начин, както клетките, които пораждат инсулин-продуциращи елементи в ембриогенезата. "

Инсулинът е необходим, за да могат клетките да абсорбират разтворената в кръвта захар - основният източник на енергия на тялото. При пациенти с определени форми на диабет, поради неспособността на бета клетките да произвеждат достатъчно инсулин, нивото на кръвната захар се повишава.

Предишни проучвания не показват тъканни прекурсори в панкреаса след раждането. Смята се, че самите бета-клетки са донякъде способни да се разделят, като по този начин попълват популацията. "Мнозинството спряха да ги търсят, тъй като има много малко от тях и те са изключително слабо активирани."

В своята работа Хаймберг и колегите му извършват следната операция върху панкреаса на мишка: изрязват част от канала, която отстранява ензимите от органа, което води до увеличаване на броя на бета-клетките приблизително два пъти за една седмица. Производството на инсулин също се увеличава, което показва функционалната активност на новите бета клетки. Хаймберг вярва, че регенеративният процес се стимулира от възпалителния отговор, който се появява след нараняване.

Впоследствие беше показано, че диференциацията на новите бета клетки зависи от гена на неврогенин-3 (Neurogenin 3 (Ngn3)), който играе ключова роля в развитието на панкреаса в ембриогенезата.

Остава да се види до каква степен новите данни могат да бъдат екстраполирани към пациенти, страдащи от диабет. Въпреки че е възможно да се лекува диабет със стволови клетки само в много отдалечено бъдеще, могат да бъдат формулирани допълнителни изследвания въз основа на резултатите от тази работа: необходимо е да се установи дали е възможно да се изолират прекурсорите на бета-клетките от човешкия панкреас и да се поддържат в култури vitro, за да могат след това да се трансплантират пациенти; и определя с какви растежни фактори можете да активирате собствените си стволови клетки на панкреаса.

Панкреас на стволови клетки - първи успех

Изследователи, работещи под ръководството на д-р Ханс Клеверс (Hans Clevers) от института Nabrecht, Холандия, първо изолират и отглеждат стволови клетки в триизмерна култура, които могат да се диференцират в два типа клетки, които образуват панкреаса.

Според д-р Клеверс това постижение е станало възможно благодарение на метода за активиране на сигнални механизми, медиирани от сигналните молекули клас Wnt и протеина Lgr5, разработен от неговата група. Тези механизми, обикновено неактивни при възрастната панкреас, са необходими за образуването на възрастни стволови клетки, способни на бърз растеж и разделяне.

Предложеният подход позволява чрез промяна на условията на културата да се насочи диференцирането на стволовите клетки в две посоки и да се получат големи количества от двете бета-клетки, произвеждащи инсулин, и клетките на панкреатичния канал. Авторите дори успяват да отгледат малки фрагменти от тъкан, наречени панкреасни органели.

Клеверс отбелязва, че работата все още е на ранен етап и са необходими допълнителни експерименти, за да се приложи подходът към културата на човешките клетки. В същото време получените резултати са много обещаващи.

Досега възможностите за лечение на болести на панкреаса са много ограничени, включително недостиг на донорски материал и висока вероятност за отхвърляне на трансплантирания орган. Следователно, ако успеят, работата на авторите може да отвори нови хоризонти за лечение на болести на този жизненоважен орган.

Евгения Рябцева
Портал "Вечна младост" http://vechnayamolodost.ru по материали на Европейската организация по молекулярна биология (EMBO):
Панкреатни стволови клетки, изолирани от мишки.

Четете статии по теми:

Прочетете също:

Ембрионални стволови клетки - лек за старостта (3)

Най-обещаващата характеристика на ембрионалните стволови клетки е тяхната способност да предизвикат прогениторни клетки, способни да се диференцират в специализирани клетки, подходящи за използване в клетъчна терапия.

Роден в риза? Дай й кръпка за сърцето!

Амниотичната мембрана - ембрионалната мембрана, която понякога се придържа към тялото на децата, “родени в риза”, се оказа друг източник на етични, универсални и сравнително достъпни стволови клетки.

Сега ще бъде възможно да се произвеждат сертифицирани клетъчни продукти в Русия

Кореспондентът на Gazeta.Ru посети откриването на нов лабораторен комплекс за производство на клетъчни продукти и предоставяне на услуги в областта на регенеративната медицина и медицинската генетика.

Стволовите клетки на тубуларните кости помагат при миокарден инфаркт

Експериментите върху мишки показват, че въвеждането на тубуларни костни стволови клетки в зоната на инфаркт на миокарда е по-ефективно от въвеждането на сърдечни стволови клетки.

Нови перспективи на индуцирани плурипотентни стволови клетки

Съдовите ендотелни клетки, получени от iPSCs, откриват нови възможности за лечение на атеросклероза, бъбречна и белодробна недостатъчност и други заболявания.

Повредени, болни и стари мускули ще възстановят Pax7

Разбирайки как протеинът Pax7 работи, ще помогне сателитните клетки да станат възможно най-активни. Това може да доведе до революция в лечението на мускулна дистрофия и вероятно ще позволи да се запази силата на мускулите в напреднала възраст.

Електронни медии, регистрирани на 12.03.2009

Сертификат за регистрация Ел номер FS 77-35618

Доказана е способността за възстановяване на панкреаса с стволови клетки от костен мозък

Изследователи от Института по неврохирургия на Maxine Dunitz в Sidars-Sinai са открили, че генът за растеж на кръвоносните съдове увеличава способността за възстановяване на панкреаса с стволови клетки от костен мозък в лабораторни мишки с инсулинозависим диабет.

Резултатите, публикувани в списание PLoS ONE, представляват нова перспектива за механизмите, включени в регенерацията на клетките, произвеждащи инсулин, и предоставят доказателства, че собственият костен мозък на диабетния пациент може по-късно да се превърне в лечение за диабет.

Учените започнаха да изследват използването на стволови клетки от костен мозък, за да регенерират панкреаса преди около 10 години. Последните проучвания, изследващи редица гени, свързани с панкреаса и как да ги доставят, използвайки трансплантация на органи или инжекция в кръвта, показват, че лечението с стволови клетки от костен мозък може да лекува или подобрява състоянието на пациентите с диабет, което е потвърдено по време на експерименти. върху експериментални мишки. Но малко беше известно за това как стволовите клетки влияят върху бета клетките, т.е. клетките на панкреаса, които произвеждат инсулин, и не е напълно изяснено как да се допринесе за непрекъснатото обновяване на бета клетките и възстановяването на производството на инсулин.

Когато изследователи от Cedars-Sinai модифицирали стволови клетки от костен мозък, осигурявайки експресията на специфичен ген (съдов ендотелен растежен фактор или VEGF), възстановяването на панкреаса беше възстановено и панкреасът при мишки успял да произведе нови бета клетки. VEGF-модифицираните стволови клетки насърчават растежа на необходимите кръвоносни съдове и поддържат активирането на гени, свързани с производството на инсулин. Стволовите клетки от костен мозък, модифицирани с друг ген PDX1, играят важна роля в развитието и поддържането на бета-клетките, което осигурява временно, но нестабилно възстановяване на бета-клетките.

„Нашето проучване е първото, което демонстрира, че VEGF насърчава реваскуларизацията и възстановяването на панкреаса, след като е повреден. Това показва потенциалните клинични ползи от използването на стволови клетки от костен мозък, модифицирани за експресиране на този ген за лечение на инсулинозависим диабет, ”казва Джон С. Иуу, доктор по медицина, професор и заместник-председател на отдела по неврохирургия в Cedars-Sinai, Sr. автор на статия, публикувана в списанието.

Диабетът е обърнат в 5 от 9 мишки, които получават инжекции от клетки, модифицирани с VEGF, почти нормалните нива на кръвната захар се поддържат през остатъка от 6-седмичния период на изследване. Останалите 4 мишки оцеляват и получават тегло, което предполага, че лечението дава положителни резултати, дори ако не осигурява пълно обръщане на заболяването. Лабораторните изследвания по-късно потвърдиха, че генетично модифицираните клетки са оцелели и са израснали в панкреаса, подпомагайки развитието на система от кръвоносни съдове и бета-клетки.

Отказ от отговорност: редакторите на MedNovelty.ru не възнамеряват да дават на читателите съвети или препоръки от медицинско естество. Не забравяйте, че само лекар може да формира професионално мнение и да дава експертни съвети за лечението на вашето заболяване. Съдържанието на редакционните материали най-често се основава на изследвания, резултатите или крайните продукти от които не могат да бъдат одобрени от регулаторните органи поради непълнота. Сайтът може да съдържа материали 12+, 16+, 18+

Заглавие на съобщенията

Оказва се, че рискът от развитие на сърдечно-съдови заболявания и диабет тип 2 в совите е по-висок, отколкото при жабите.

Резултатите от новото изследване са публикувани в Journal of Clinical Endocrinology. Метаболизма.

Храни, богати на мазнини и въглехидрати, особено силно засягат системата за възнаграждение в мозъка.

В света се забелязват огнища на затлъстяване, придружени от затлъстяване и преяждане.

През 1999 г. учените първо описаха три случая на деца, страдащи от дефицит на растежен хормон. Изненадващо, проучванията показват, че техните нива на растежен хормон са по-високи от тези на общата популация.

Домашните пациенти ще получат уникална клетъчна технология за лечение на диабет, която ще им позволи да спрат да използват редовни инсулинови снимки.

Изследователи от кралския колеж в Лондон и университета на Лунд в Швеция са успели да обяснят защо лекарствата за диабет, които работят в животински модели, не са толкова успешни в човешките опити.

Instagram снимки се публикуват ежедневно от потребителите на Instagram. И двамата демонстрират изискания си вкус, принуждавайки приятелите си да поглъщат слюнка от вида на вкусни вафли или пилешки бутчета, и те се съревновават в умно стилизирано от ярки пъстри макарони.

Учените от клиниката в Кливланд и Медицинското училище в Нюйоркския университет установиха, че затлъстяването съкращава живота с 47% повече от тютюнопушенето.

Повечето хора на сутринта бързат просто да забравят за отваряне на завесите.

Ново проучване показа, че плъхове с метаболитен синдром, хранени с храни с високо съдържание на захар и холестерол и допълнително дадени екстракт от синя царевица, показват значително подобрение на систоличното налягане, повишени нива на добър холестерол (липопротеин с висока плътност) и триглицериди.

Терминът "здравословно затлъстяване" се появява през последните 15 години и едва наскоро учените се интересуват от неговото съществуване.

На мнозина е позната неизменна истина: ние сме това, което ядем. Разбира се, няма да се превърнем в оранжев корен, когато ядем моркови. Разбираемо е, че консумацията на моркови ще повлияе на нашето развитие по-различно от консумацията на захарен памук.

Лакомията води до здравословни проблеми и тези проблеми могат дори да съкратят продължителността на живота. Става дума за затлъстяване, диабет и сърдечни заболявания.

Ползите от зърнените култури отдавна са известни. Предишни проучвания показват техния положителен ефект върху нивата на холестерола и кръвната захар, като по този начин намаляват риска от сърдечни заболявания. Също така, пълнозърнестите храни увеличават усещането за ситост, като помагат за борбата с излишни килограми.

Храната определя всичко. Има една поговорка: ние сме това, което ядем. Учените твърдят, че нашият сън също зависи от това, което ядем.

Служителите на норвежкия институт доказаха способността на връзката да се движат в пространството с тестостерон. Оказа се, че мъжете го правят много по-добре от жените. Причината за това е хормоналния фон на половете.

Експерти от Университета в Колорадо са убедени, че популярните герои от карикатурите с външния им вид допринасят за развитието на затлъстяването.

През последните 40 години простата въглехидратна фруктоза, получена от плодове и зеленчуци, е добавена само към американските диети. Поради добавянето на високо фруктозен царевичен сироп към много безалкохолни напитки и сладкиши, фруктозата съставлява около 10% от американския калориен прием.

Изследователи от Фондация за медицински изследвания в Оклахома точно идентифицирали клетката, която предизвиква белези в мастната тъкан. Резултатите осигуряват по-добро разбиране на биологичния процес, който съпътства затлъстяването и може да доведе до диабет.

Панкреасни стволови клетки

шарлатани и мошеници като Захаров предлагат лечение на диабет със стволови клетки. отдавна е установено, че въвеждането на стволови клетки много често провокира рак!

в медиите обсъждат причините за смъртта на известни художници.
Наскоро медиите публикуваха информация, че Михаил Задорнов и Дмитрий Хворостовски могат да получат фатална болест по същата причина. Предполага се, че художниците биха могли да прибягнат до някаква „инжекция на младостта“, състояща се от стволови клетки. Това заключение е постигнато от експерти, които забелязали, че малко преди смъртта, горепосочените звезди започват да изглеждат много по-млади от годините си. През 2011 г. медицинска сестра от частна клиника даде интервю, в което заяви, че надеждно знае, че Александър Абдулов е прибягнал до този вид лечение. Освен това, виждайки положителната динамика, той донесе приятелите си в институцията, по-специално, Олег Янковски. така може да zadornov и Khvorostovsky също прибягва до "инжекции на младежта"?

Според публикуването на "аргументи и факти", следата от това чудотворно средство за подмладяване може да се проследи и в смъртта на други кино и поп звезди: Полищук, Олег Янковски, Анна Самохина и Фриске. Внезапната смърт на артистите се обяснява по следния начин: всички те биха могли да се включат в лечението на ембрионални стволови клетки, което според изследвания в някои случаи води до обратен ефект. Според статия в научното списание "стволови клетки и транслационна медицина" този вид подмладяване понякога причинява непоправима вреда на човешкото тяло.

Въпреки това е невъзможно да се твърди, че третирането на стволови клетки е причинило смъртта на народни фаворити, тъй като няма неоспорими доказателства за този факт. "В някои случаи тези клетки предотвратяват развитието на рак, а в други - допринасят за: мезенхимните стволови клетки могат да се дегенерират в така наречената ракова стволова клетка, която поражда тумор. нещо повече, обикновено е най-злокачествено и упорито.

Последният имот е един от основните за стволови клетки. и в това те са много сходни с раковите клетки “, се казва в статия, озаглавена„ Ракови клетки, ракови стволови клетки и мезенхимни стволови клетки: техният ефект върху развитието на рака “. Твърди се, че редица звезди, които са се възползвали от „инжекциите на младостта“, са избегнали смъртта. Като пример са дадени София Ротару и Лев Лещенко. това показва: почти невъзможно е да се отгатне дали терапията със стволови клетки е подходяща за конкретен човек. това, както съобщава пресата, е подобно на "играта на напръстници".

ЗАМЕСТВАНЕ НА β-КЛЕТКИ НА ПАНКРУСНАТА ЖЕЛЕЗА В ДИАБЕТНИТЕ МЛИТУЗИ Текст на научна статия по специалността "Медицина и здравеопазване"

Резюме на научна статия за медицината и общественото здраве, автор на научна работа е С. Пелегрини, В. Сорди, Л. Пиемонти.

Пациентите със захарен диабет (ДМ) страдат от деструкция или дефицит на В-клетки на панкреаса, като заместването им с функционално пълни инсулин-продуциращи клетки е единственият възможен начин за лечение на това заболяване. Въпреки успешната антигликемична ефикасност и намаления риск от вторични усложнения, трансплантацията на панкреатични островни клетки или на самия панкреас при хора е усложнена от необходимостта от поддържане на имуносупресията през целия живот, както и от намаляване на броя на донорите на органи. В тази статия представихме преглед на настоящите подходи, насочени към намиране на неограничени източници, подходящи за трансплантация на чувствителни към глюкоза инсулин-продуциращи клетки. По-специално, ние обсъждаме сложните аспекти на механизмите на пролиферация на В-клетки и / или тяхната неогенеза in vivo, трудности при използването на ксеногенни панкреатични островчета, както и настоящите постижения в областта на диференциацията на ембрионални и индуцирани полипотентни стволови клетки (най-обещаващият и важен източник на -клетки).

Свързани теми в медицинските и здравните изследвания, автор на научната работа - С. Пелегрини, В. Сорди, Л. Пиемонти,

β-клетъчна трансплантация при захарен диабет

Пациентите със захарен диабет страдат или от унищожаване на клетките на панкреаса, или от прогресивно влошаване на тяхната функция. Следователно трансплантацията на интактна клетъчна популация не е възможна. Ясно е, че има възможност за повишена имуносупресия и др Той е неограничен източник за чувствителни към глюкоза инсулинови секретиращи клетки. In-vivo, по-специално, сложните аспекти на вътреклетъчната пролиферация и / или неогенеза in vivo и най-обещаващите и релевантни източници на вътреклетъчни клетки,

Текст на научната работа на тема “Замяна на β-клетки на панкреаса при захарен диабет”

Захарен диабет. 2013; (3): 11-20

Заместване на p-клетките на панкреаса при захарен диабет

1.2Pellegrini S., "Sordi V.," Piedmonti L.

Изследователски институт за диабет, болница "Сан Рафаеле", Милано, Италия

2 Университет Инсубриа, Варезе, Италия

Пациентите със захарен диабет (ДМ) страдат от деструкция или дефицит на В-клетки на панкреаса, като заместването им с функционално пълни инсулин-продуциращи клетки е единственият възможен начин за лечение на това заболяване. Въпреки успешната антигликемична ефикасност и намаления риск от вторични усложнения, трансплантацията на панкреатични островни клетки или на самия панкреас при хора е усложнена от необходимостта от поддържане на имуносупресията през целия живот, както и от намаляване на броя на донорите на органи. В тази статия представихме преглед на настоящите подходи, насочени към намиране на неограничени източници, подходящи за трансплантация на чувствителни към глюкоза инсулин-продуциращи клетки. По-специално, ние обсъждаме сложните аспекти на механизмите на пролиферация на В-клетки и / или тяхната неогенеза in vivo, трудности при използването на ксеногенни панкреатични островчета, както и настоящите постижения в областта на диференциацията на ембрионални и индуцирани полипотентни стволови клетки (най-обещаващият и важен източник на -клетки).

Ключови думи: диабет; В-клетки на панкреаса; пролиферация; стволови клетки

v-клетъчна трансплантация при захарен диабет

1,2Pellegrini S., "Sordi V.," Piemonti L.

Институт за изследване на диабета, Оспидале Сан Рафаеле, Милано, Италия 2 Universita degli Studi dell'Insubria, Варезе, Италия

Пациентите със захарен диабет страдат или от унищожаване на клетките на панкреаса, или от прогресивно влошаване на тяхната функция. Следователно трансплантацията на интактна клетъчна популация не е възможна. Ясно е, че има възможност за повишена имуносупресия и др Той е неограничен източник за чувствителни към глюкоза инсулинови секретиращи клетки. In-vivo, по-специално, сложните аспекти на вътреклетъчната пролиферация и / или неогенеза in vivo и най-обещаващите и релевантни източници на вътреклетъчни клетки,

Ключови думи: захарен диабет, панкреатични клетки, пролиферация; стволови клетки

Според Световната здравна организация (СЗО) през 2012 г. около 347 милиона души по света са страдали от захарен диабет. Според прогнозите този брой ще се увеличи до 552 милиона до 2030 г. [1]. Този брой включва пациенти с диабет тип 1 и тип 2 (диабет тип 1, диабет тип 2), чийто дял е съответно 10% и 90% от общия брой пациенти с диабет [2]. T1DM и T2DM се характеризират с инсулинов дефицит, който причинява хипергликемия, която от своя страна може да доведе до сериозни здравословни проблеми, включително кетоацидоза, бъбречна недостатъчност, сърдечносъдови заболявания, невропатия и слепота. T1D е хронично заболяване, при което инсулин-продуциращите В-клетки на панкреаса се разрушават в резултат на автоимунни процеси. Обикновено това заболяване се среща при лица под 30 години. От друга страна, T2D е причинена от

главно от наличието на инсулинова резистентност и в повечето случаи е придружено от затлъстяване и се среща в напреднала възраст. Основните методи за лечение на хипергликемия при пациенти, страдащи от диабет тип 1 и при някои пациенти, страдащи от диабет тип 2, са прилагане на екзогенен инсулин и редовно проследяване на нивата на кръвната захар. Въпреки това, въпреки способността да се спаси живота на пациента, инсулиновата терапия не позволява възобновяване на нормалната физиологична регулация на нивата на кръвната захар и премахване на риска от опасни хипогликемични състояния и дългосрочни усложнения [3]. През последните години благодарение на използването на нови технологии бе постигнат напредък в разработването на терапии като инсулин с бавно освобождаване или инсулинови помпи (помпи), което значително подобри контрола на кръвната захар и качеството на живот при пациенти с диабет. Тези методи обаче не позволяват

Препоръчително е да се лекува това заболяване [4]. Единственият възможен начин за лечение на диабета е да се създаде нов източник на В-клетки, които могат да изпълняват две ключови функции: оценка на нивата на кръвната захар и глюкозо-зависимата инсулинова секреция.

Замяна на някои клетки с други клетки

Алогенни клетки на възрастен

Понастоящем единственият възможен начин за лечение на пациенти с диабет тип 1 е трансплантация на панкреасни или панкреасни острови. Трансплантирането на цял орган на панкреаса е много ефективен начин за постигане и поддържане на дългосрочен физиологичен контрол на нивата на кръвната захар. Въпреки това, поради различните рискове, свързани с извършването на хирургическа интервенция, този метод рядко се използва за лечение на диабет [5]. За разлика от това, трансплантацията на панкреатичните островчета изисква минимална инвазивна хирургична намеса, тъй като тя се изпълнява като част от перкутанната интервенция при рентгенов контрол и се състои в администриране на лекарственото средство, съдържащо островчетата, в черния дроб на реципиента през порталната вена [6]. Една функционираща трансплантация при пациент с диабет тип 1 премахва хипогликемичните епизоди, коригира нивото на гликирания хемоглобин (HbA1c), намалява или напълно елиминира риска от вторични усложнения, свързани с това заболяване и в най-оптималните случаи позволява постигане на инсулинова независимост [7]. Постоянно се подобряват резултатите и безопасността на процедурата за трансплантиране на клетки от панкреатични островчета. Според данните, представени в съвместния регистър за трансплантация на островчета (CITR) [7], показателят за инсулинова независимост по отношение на

3 години след трансплантацията постоянно се подобрява. В ранните етапи (1999–2002 г.) той е 27%, а в средния етап (2003–2006 г.) - 37%, а през последните години (2007–2010) - 44%. В допълнение, пет независими центъра (Едмънтън, Минесота, Женева, Милано и Лил) съобщават за постигане на показатели за инсулинова независимост 5 години след операцията, над 50% [8], което на практика отговаря на резултатите, постигнати с трансплантацията на целия панкреас, според според Международния регистър за трансплантация на панкреаса. В момента в редица страни, включително Канада, Обединеното кралство, Швеция и Скандинавските страни, Швейцария и Австралия, трансплантацията на панкреатичните островни клетки се прехвърля напълно от категорията на изследваните технологии в клиничната практика. Понастоящем процедурата за трансплантация на панкреасни клетки е в момента

Захарен диабет. 2013; (3): 11-20

Лезиите не могат да се считат за стандартна интервенция поради две основни проблеми: необходимостта от имуносупресия през целия живот (придружена от редица нежелани странични ефекти) и липсата на способност за събиране на панкреаса от донори със запазена сърдечна дейност и установена мозъчна смърт. Последните са единственият възможен източник на човешки панкреатични островни клетки, подходящи за клинична употреба. Поради тези причини трансплантацията на панкреатичните островни клетки се извършва само при пациенти, страдащи от диабет, при които въпреки внимателно контролираната инсулинова терапия има необяснима метаболитна нестабилност, усложнена от рецидивиращи епизоди на хипогликемия [9]. В такива случаи съществува специална необходимост от разработване на нови стратегии за решаване на проблема за възстановяване на ендокринната функция на панкреаса при пациенти, страдащи от диабет. В тази прегледна статия ще бъдат обсъдени много от интензивно изследваните медицински подходи, по-специално, B-клетъчната пролиферация / регенерация, ксенотрансплантацията и диференциацията на ембрионални или полипотентни стволови клетки (фиг. 1).

Автотрансплантация на клетки при възрастни (клетъчна пролиферация или трансдиференциране in vivo / ex vivo)

За разлика от кръвта, кожата или червата, чиито тъкани се характеризират с относително висока степен на клетъчна промяна, В-клетките на панкреатичните острови са неактивна клетъчна популация, докато при едногодишни мишки скоростта на пролиферация на тези клетки е 0,1—0,3% / ден. 10]. Въпреки това, последните проучвания показват също, че масата на В-клетките е под динамичен контрол и действителната клетъчна маса определя връзката между репликацията и апоптозата [11, 12]. При хората естественото разширяване на пула от В-клетки се появява в неонаталния период, като постепенно изчезва в ранна детска възраст [13]; При възрастни повишената репликация на В-клетките може да възникне при определени физиологични и патологични състояния, като бременност [14], или с развитието на инсулинова резистентност, причинена от затлъстяване [15]. Така, при пациенти с диабет, можете да използвате специални лекарства, за да увеличите броя на В клетките в ех vivo за целите на трансплантацията, а също така можете да стимулирате ендогенна клетъчна пролиферация in vivo, за да увеличите пула от В клетки. В действителност, при пациенти, страдащи от T1DM, B-клетъчната регенерация се наблюдава както по време на диагнозата [16], така и няколко години след откриването на заболяването [17, 18]. Освен това, Y. Dor et al. в проучване с проследяващи клетъчни линии при мишки, се наблюдава значително повишаване на митотичния индекс на В-клетки след лека травма на панкреаса от

Захарен диабет. 2013; (3): 11-20

Замяна на р-клетки с не-в-клетки

Панкреасни стволови клетки

Заместване на клетките в клетките

Ductal или a-клетки

Островчета (човешки или ксеногенни)

В-клетки, подходящи за трансплантация

Ембрионални стволови клетки

Увеличение в броя на клетките (in vivo / ex vivo)

Индуцирани полипотентни стволови клетки

p-клетки # a-клетки # Клетки на каналите За стволови клетки p.zh. Ембрионални стволови клетки iPS клетки Фигура. 1. Експериментални подходи за лечение на захарния дибет, насочени към увеличаване на броя на р-клетките в тялото на пациента.

70% от орган [19] или селективна генетична аблация на В клетки [20]. Трансфектирането на различни молекули, участващи в регулацията на клетъчния цикъл, като например cdks и циклини в панкреатичните островчета на гризачи и хора при ех vivo условия, води до увеличаване на скоростта на репликация на b-клетки [21, 22], но дългосрочната експресия на тези молекули също увеличава риска онкогенезата. По-безопасен вариант е да се добавят различни растежни фактори към клетъчната култура, като растежен хормон (GH), глюкагон-подобен пептид-1 (GLP-1) или хепатоцитен растежен фактор (HGF), за които е известно, че могат да увеличат скоростта на репликация в клетки от гризачи [23]; но, за съжаление, увеличаването на пролиферацията е придружено от загуба на b-клетки от техните основни свойства, като способността да се експресира Pdx-1 или инсулин [24]. Според резултатите от предварителните клинични проучвания за ефикасност, проведени с участието на пациенти, получаващи GLP-1, се смята, че in vivo терапията, използвайки дългодействащи GLP-1 аналози (екзенатид или лираглутид) може да стимулира репликацията на В-клетките при пациенти. страдащи от диабет тип 2 [23, 25]. Въпреки това е необходимо да се получат дългосрочни резултати, доказващи наличието на такъв положителен ефект при пациентите.

Неотдавна също беше показано, че пролиферацията на В-клетки може да бъде повлияна от нов хормон, бета-татрофин, който се експресира главно в черния дроб и мастната тъкан. Преходната експресия на бетатрофин в черния дроб при мишки причинява значителна пролиферация на В-клетки, увеличаване на масата на В-клетките и подобрява глюкозния толеранс [26]. Механизмът на действие на бетатрофин при мишки и хора все още не е проучен, но възможността за използване на този хормон е от голям интерес.

В областта на възможностите за въздействие върху пролиферацията на В-клетки, се опитва и генна терапия чрез обръщане на вмъкването на гени, способни да удължат жизнеспособността на В-клетките. През последните 30 години е разработена цяла серия от клетъчни линии от гризачи [27, 28] и са направени многобройни опити за създаване на човешки В-клетъчни линии, получени от различни части на панкреаса, но тези клетки са били изключително слаби в производството на инсулин, или тази способност е ограничена до няколко пасажа на клетъчната линия [29, 30]. През 2005 г. М. No. gshYta et al. [31] докладваха за успешното създаване на функционираща човешка NAKT-15 b-клетъчна линия, която в дългосрочен план би трябвало да позволи клетъчна терапия за диабет, но от 2005 г. насам

съобщението за използването на тази клетъчна линия не е публикувано. През 2011 г. е развита друга човешка В-клетъчна линия [32] от модифицирани панкреасни ембрионални клетки с лентивирусен вектор, експресиращ SV40LT под контрола на инсулинов промотор. Инсулиномите, които се появяват след имплантирането на SCID мишки, след това се трансформират с лентивирусен вектор, експресиращ човешка теломеразна обратна транскриптаза (hTERT) и отново имплантирани в други SCID мишки, за да се увеличи допълнително пролиферацията на В клетките. Описана е и друга клетъчна линия, EndoC-VS, която е способна да секретира инсулин в отговор на глюкозна стимулация. Тази клетъчна линия е стабилна най-малко при 80 пасажа и експресира много В-клетъчно-специфични маркери, докато не изразява в значителна степен маркери на други типове панкреатични клетки. Като се има предвид въпросът за клиничната употреба, трябва да се каже, че човешка В-клетъчна линия от второ поколение в момента се разработва, използвайки "безсмъртни" техники на обратими клетки, които избягват риска, свързан с използването на клетки, третирани с гени, потенциално свързани с онкогенеза,

Друга напълно различна гледна точка е предположението, че при условия като бременност или затлъстяване механизмът, отговорен за увеличаването на броя на В-клетките, е неогенезата, а не пролиферацията. Това предположение се подкрепя от скорошна аутопсия на човешкия панкреас, взет по време или след бременност: Butler AE et al. [33] наблюдава увеличение на броя на новите малки островчета, а не увеличаване на репликацията на В клетките, увеличаване на размера на островчетата или промяна в тежестта на апоптозата. Авторите също наблюдаваха увеличаване на броя на инсулин-позитивни клетки в каналите, което показва способността на клетките на канала да се диференцират в В клетки при определени условия или че стволовите / прогениторните клетки на панкреаса са разположени в панкреатичните канали. В предишни проучвания, клетки, които се разглеждат като панкреасни стволови клетки, също се намират сред екзокринни клетки и ендокринни островчета, което показва широкото разпространение на тези клетки в панкреаса, както и липсата на точното им описание [34]. Експериментите, при които плъхове са били резецирани при 90% от масата на панкреаса, показват наличие на изразена регенеративна способност на този орган при възрастни [19, 35]. В същото време, в едно скорошно проучване, беше показано, че този тип регенерация е в съответствие с парадигмата на диференциация-ре-диференциация, според която зрелите клетки на панкреатичните пътища се диференцират в състояние, подобно на състоянието на прогениторните клетки, и след това

Захарен диабет. 2013; (3): 11-20

Те реагират с образуването на всякакъв вид клетки на панкреаса, включително В клетки [36]. В това проучване авторите също така наблюдават повишена скорост на пролиферация на съхранените В клетки. Следователно, репликацията и неогенезата не са взаимно изключващи се процеси и допринасят за поддържане на необходимата маса на басейна на В-клетките след раждането. Все пак, в зависимост от вида и възрастта на индивида, всеки един от тези механизми може да има различна степен на значимост [37].

Изследвана е способността на a-клетките да служат като възможен източник на образуване на инсулин-продуциращи клетки, тъй като при пациенти с диабет тези клетки са запазени [38] и заедно с b-клетките са най-многобройните ендокринни клетки на островчетата. Collombat, R. et al. Наскоро беше установено, че ектопичната експресия на Pax4 е способна да ускори трансформацията на зрелите а-клетки в b-клетки, което им позволява да лекуват химически индуциран диабет при мишки [39]. Освен това, Thorel et al. също така потвърди способността на a-клетките да се диференцират, тъй като в експерименти, използващи модел със селективна аблация на В-клетки, използващи дифтериен токсин, авторите наблюдаваха възможността за спонтанно превръщане на a-клетки в нови функциониращи В-клетки [40]. Наличието на такава възможност при хора не е установено и резултатите от експерименти с химически индуциран диабет при по-ниските примати не разкриват способността на В клетките да се регенерират [41].

Ксеногенни зародишни клетки или възрастни

Един от най-очевидните начини за получаване на голям брой островчета, необходими за трансплантационната терапия при диабет, е използването на островчета Лангерханс, получени от други видове. Повечето опити в тази област са насочени към използването на панкреатичните островчета на прасето поради различни причини: 1) свинският панкреас, който е страничен продукт при производството на свинско месо, в продължение на много години преди разработването на рекомбинантен човешки инсулин, се използва като екзогенен източник за инсулин; 2) островчетата на панкреаса на свинята регулират нивото на глюкоза в същия физиологичен диапазон, както при хората; 3) като се използват технологии, подобни на тези, използвани при хората за изолиране на островни клетки, възможно е да се постигне висока производителност при получаване на клетки от островчета на прасета и 4) прасетата са подходящи за генетична модификация, за да направят панкреатичните островчета по-подходящи за трансплантация на хора [42], Широкото разпространение на свински островни клетки при хората обаче е ограничено от два основни проблема. Първият е рискът от развитие на супер-остра имунологична реакция на отхвърляне, тъй като хората имат естествено образувани антитела, които реагират със захарида Галактоза-алфа-1,3-Галактоза (Gal), експресиран

Захарен диабет. 2013; (3): 11-20

върху клетки на по-ниски бозайници, но не експресирани върху човешки или маймунски клетки [43], и свързването на антитела с Gal антигени води до почти незабавно активиране на комплементната система, последвано от разрушаване на присадката. Вторият е рискът от зооноза, защото свински ендогенни последователности на ретровирусен ген (PERV) in vitro могат да причинят инфекция на различни клетки от бозайници [44, 45] и тези последователности могат да бъдат активирани след ксенотрансплантация [46]. За преодоляване на проблема, свързан с реакцията на свръх-остра имунологична отхвърляне, бяха създадени няколко трансгенни прасета, включително прасета от нокаут Gal [47], трансгенни прасета в човешки панкреатични островни клетки, регулиращи системата на комплемента (hCD46) [48], прасета. с трансгенна експресия на LEA29Y (вариант с висок афинитет на инхибитора на T-клетъчна костимулация CTLA-4Ig) под контрола на ген на свински инсулин [49]. Въпреки получените окуражаващи резултати [50], сега е очевидно, че за ксенотрансплантация е необходим силен режим на имуносупресия [51]. Друга изследвана в момента стратегия за решаване на проблема с имуногенността на свинските клетки е микрокапсулиране на островни клетки: клетките са покрити с биосъвместима мембрана (най-често това е бариев алгинат) и поради изменението на молекулната маса под действието на капсулната субстанция, клетките могат да бъдат скрити от ефектите на имунната система на гостоприемника. През 2000 г. Rayat GR et al. показват, че in vitro капсулирането предпазва островните клетки на новородени прасета от цитотоксичните ефекти на човешки антитела и комплементната система, както и елиминира диабета на атимични мишки [52]. Проучвания са проведени върху по-ниски примати [53] и проучвания върху хора [54], при които не е проведена екзогенна имуносупресивна терапия. Въпреки обещаващите резултати, получени при използване на капсулирани клетки от прасета, които запазват функционалния си капацитет в продължение на 6 месеца [53] или повече [55], остава неясно дали запазват своята жизнеспособност и функционират в дългосрочен план. Не е възможно да се избегне възможността за предаване на ендогенна ретровирусна инфекция на прасета при трансплантация на органи и тъкани, тъй като кодиращите последователности и вирусни елементи присъстват в различни числа в ядрата на всички свински клетки [56]. Получените данни обаче показват, че тези вируси не представляват значителна опасност за тези, които влизат в контакт с пациента (например роднини, медицински персонал). В други проучвания, разглеждащи този проблем, не са открити признаци на предаване на PERVs от свински клетки към човешки клетки, чувствителни към тези вируси in vitro [57, 58] и при пациенти, които преди това не са открити признаци на ретровирусна инфекция.

Лечение с тъкан от свине [58, 59]. Тези проучвания намаляват значимостта на тези проблеми, но за да се определи точно реалният риск от предаване на PERV на трансплантирани реципиенти, има нужда от други предклинични проучвания и повече опит в in vivo. По този начин, обещаващи резултати наскоро са получени от гледна точка на увеличаване на времето за оцеляване и повишаване на безопасността на трансплантираните клетки на островчетата на свинете, обаче остават редица нерешени проблеми, като създаване на оптимално трансгенно прасе донор, подбор на имуносупресивни лекарства, капсулиране на островни клетки и избягване на зооноза,

Замяна на В-клетки с други не-В-клетки

Диференциране на ембрионални стволови клетки

Понастоящем техниката на диференциация на стволови клетки осигурява много възможности за клетъчна терапия на патологии, като например SDS, причинена от нарушаване на един тип клетки. Изследвани са много видове стволови клетки [34], но ембрионалните стволови клетки (ESCs) се считат за най-обещаващи, защото имат почти неограничен пролиферативен капацитет и могат да се диференцират в почти всеки тип соматични клетки. Първите опити за диференциация на hESCs в В клетките се дължат на наличието на предимство при селекцията и последващия растеж на недиференцирани клетки, които спонтанно експресират инсулин [60] или нестин [61], но полученото количество инсулин е много малко. Важна стъпка напред беше направена от групата Baetge, която, с цел разработване на протокол за диференциация, изследваше сигнали, които стимулират развитието и са способни да индуцират органогенеза на панкреаса in vivo, което в крайна сметка би трябвало да позволи първите определени ендодермални клетки да бъдат получени от човешки ЕСС [62]. след това клетките, които произвеждат инсулин [63]. Използвайки този петстепенен протокол за диференциация, който съответства на всеки от етапите на образуване на панкреас, авторите успяха да постигнат образуването на приблизително 7% от клетките, способни да произвеждат инсулин in vitro. По-късно другите две групи изследователи, използвайки различни условия на клетъчна култура, потвърдиха данните, че ЕСК могат да се диференцират в клетки, произвеждащи инсулин, въпреки че са по-малко ефективни [64-66]. По-късно, Baetge и колегите подобряват резултатите си чрез оптимизиране на протокола за диференциация in vitro и чрез трансплантация на панкреасни прогениторни клетки, получени от ESC в мишки, така че след три месеца in vivo имплантираните клетки се диференцират в зрели ендокринни клетки, способни да регулират нивата.

кръвна захар след предишна експериментална индукция на диабет [67]. Същата група изследователи, чрез по-нататъшно оптимизиране на протокола за диференциация за линията ESC CyT49, наскоро разработи скалируема и стандартизирана система за получаване на функционално пълни прогениторни клетки от човешки ESCs [68], което също е голяма стъпка към клиничното прилагане. Въпреки значителния напредък трите основни проблема ограничават приложимостта на клетките, произвеждащи инсулин, получени от ИСС. На първо място, поради факта, че тези клетки са полипотентни, недиференцираните клетки in vivo служат като източник за развитието на тератоми и тяхната трансплантация неизбежно ще доведе до образуването на тумор поради наличието на някои остатъчни недиференцирани клетки [67]. Направени са няколко опита за търсене на повърхностни маркери, които биха позволили селекцията на панкреасни прогениторни клетки [69, 70] или премахване само на липопотентни клетки [71], но безопасността на избраните клетки също трябва да бъде допълнително проучена. Друг нерешен проблем е свързан с данните, че всички клетъчни линии на ESC имат различна степен на склонност да се диференцират към клетките на панкреаса [72]. Във връзка с това, за да се идентифицират ESC линии, които могат да улеснят определянето на генетичното съответствие на донорните клетки към клетките на пациента и по този начин да се предотврати отхвърлянето на присадката и необходимостта от имуносупресия през целия живот, е необходимо да се изследват много клетъчни линии (и съответно да се оптимизира протокола за диференциация). Последният голям проблем, който до голяма степен ограничава използването на ИСС в много страни по света, е съществуването на етични аспекти, свързани с необходимостта от унищожаване на човешки ембриони за получаване на тези клетъчни линии.

Диференциране на индуцирани полипотентни стволови клетки

През 2006 г. възникна възможно решение на много от проблемите, свързани с използването на ИСС, когато Яманака и колегите чрез принудително изразяване на

Четири гена (OCT4, SOX2, KLF4 и c-MYC) са в състояние да препрограмират развитието на соматични клетки на възрастни мишки [73] и възрастни [74] с образуването на индуцирани полипотентни стволови клетки (iPSC). Тези клетки запазват основните свойства на ESCs, такива като нипотенциалност и способност за самостоятелно поддържане, но в същото време осигуряват способността за образуване на автоложни клетки, които могат да бъдат използвани за клетъчна терапия. Наскоро човешки iPSCs са получени чрез препрограмиране на много видове соматични клетки [75], и много изследвания съобщават за успешна диференциация на тези клетки в неврони, кардиомиоцити, хепатоцити или хематопоетични

Захарен диабет. 2013; (3): 11-20

клетки [76]; обаче, диференцирани клетки, получени от iPSC, могат също да бъдат полезни при in vitro моделиране на заболявания и / или изследване на лекарства. По този начин, тези клетки могат да служат като алтернативен и по-мощен източник на стволови клетки, използвани за лечение на различни заболявания, включително диабет тип 1. K. Tateishi et al. през 2008 г. iPSC беше успешно докладван за успешното диференциране в клетки, произвеждащи инсулин [77], използвайки четиристепенния протокол, описан за диференциацията на ЕСС [64]. Клетките, получени от iPSC, бяха положителни за С-пептид и глюкагон и реагираха на глюкоза, обаче, секрецията на инсулин от тези клетки беше прекалено слаба. Впечатляващи резултати са докладвани в няколко in vitro проучвания, в които авторите използват други протоколи, които имитират механизмите на развитие на панкреаса in vivo, за да насочат iPSC диференциацията към В-подобни клетки [78-80]. Клетки, които произвеждат инсулин, също се получават от iPSC, образувани в резултат на препрограмирането на фибробласти на двама пациенти, страдащи от диабет [81], което дава възможност не само за осъществяване на автотрансплантационна клетъчна терапия при диабет, но и за in vitro моделиране на това заболяване. Също така, човешки iPSC клетки бяха получени чрез препрограмиране на панкреатични В-клетки и последващо повторно диференциране в инсулин-продуциращи клетки, които имаха ефективност по-голяма от тази, получена в резултат на iPSC диференциация, получена чрез препрограмиране на не-iPSC клетки. клетки на същия пациент [82]. Резултатите от тази работа показват, че iPSCs притежават епигенетичната памет на оригиналната клетка дори след препрограмиране и че не само ESCs, но също така iPSC клетъчните линии се характеризират с различна степен на способност да се диференцират в B клетки. Въпреки това, в изследване, извършено от J.M. Polo et al. при използване на iPSC клетъчни линии, получени чрез препрограмиране на различни соматични клетки от мишки, беше показано, че по време на първите пасажи iPSC запазва временната епигенетична памет на техните соматични прекурсорни клетки, което засяга експресията на ген и способността за диференциация и че по време на следващите пасажи на тези клетки има значително отслабване на тези разлики, което показва, че при голям брой пасажи, всички iPSC клетъчни линии имат еднаква степен на способност да се диференцират д [83]. Но освен възможността за диференциране, основният проблем, свързан с използването на iPSC, е тяхната сигурност. В действителност, освен онкогенните свойства, дължащи се на полипотенциалност, използването на онкогени за препрограмиране, както и фактът, че онкогените са необратимо вкарани в генома на клетката (поради използването на ретровируси и лентивируси), може да причини

Захарен диабет. 2013; (3): 11-20

злокачествени новообразувания. Проведени са проучвания, които не интегрират аденовирусни вектори, епизомални вектори и стратегии без ДНК в клетъчния геном [84], но тези технологии изискват подобрение в ефективността на индукцията и качеството на 1RBS клетките. По-обещаващо е използването на химикали, които не причиняват промени в клетъчния геном и са в състояние функционално да заменят екзогенните транскрипционни фактори [85, 86]. Като цяло, трябва да се каже, че високите очаквания са поставени върху 1RBS клетките в рамките на клетъчната заместителна терапия за диабет, но са необходими много изследвания за повишаване на безопасността и ефективността на процесите на препрограмиране и диференциация.

Опитите да се излекува диабет чрез индуциране на функциониращи инсулин-продуциращи клетки никога не са спирали. Наличието на неограничен брой функционално подходящи трансплантационни материали ще позволи прехвърлянето на трансплантанти на островни клетки от категорията на ограниченото лечение към категорията на по-често интервенция; Трансплантацията на човешки островни клетки или целият панкреас не е истинско мащабно решение на проблема, в резултат на което се проучват различни подходи за решаване на проблема за намаляване на броя на донорите на органи. Всяка от тези стратегии има своите предимства и недостатъци и на този етап е трудно да се определи с достатъчна точност кой от методите е най-обещаващ. Острови клетки

свински панкреас има значително предимство, тъй като те имат пълни B-клетъчни функции и могат да бъдат получени в значителни количества, но е необходимо решение на проблемите, свързани с PERV инфекцията и риска от развитие на зооноза. При in situ условия, пролиферацията на В клетки и / или тяхната регенерация от панкреатични стволови клетки или клетки изглежда по-приемлива, тъй като елиминира необходимостта от имуносупресия; в допълнение, крайният продукт се очаква да секретира инсулин по начин, зависим от глюкоза. За съжаление, действителната ефективност на този метод при хората не е окончателно доказана. През последните години се наблюдава нарастващ интерес към лечението с използването на клетки, получени от диференциация на стволови клетки. В същото време най-обещаващият източник на стволови клетки са ИСС и iPSC, поради способността им за безкрайна пролиферация и изключителни способности за диференциация. Независимо от факта, че iPSC позволява прилагането на автотрансплантационна клетъчна терапия, е разработена стъпка по стъпка система за оптимална диференциация in vitro само за една линия от ЕСК, поради което възможностите за лечение на специфични пациенти все още са ограничени. Освен това, когато се използва този тип клетки, аспектът на безопасност запазва своята критична роля, тъй като съществува риск от онкогенеза, която може да възпрепятства използването им в клиниката. Въпреки наличието на такива значими проблеми, в момента има реална възможност за използване на клетъчна терапия за лечение на диабет в близко бъдеще.

Авторите декларират липсата на двойственост (конфликт) на интереси при писането на този ръкопис.

1. Whiting DR, Guariguata L, Weil C, Шоу J. IDF диабет за 2011 и 2030. Диабет изследвания и клинична практика. през 2011 г.; 94 (3): 311-321. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.diabres.2011.10.029

2. Stanekzai J, Isenovic ER, Mousa SA. Възможности за лечение на диабета: Потенциална роля на стволовите клетки. Изследване на диабета и клинична практика. 2012; 98 (3): 361-368. D0I: http: //dx.doi.org/10.1016/j.diabres.2012.09.010

3. Van Belle TL, Coppieters KT, Von Herrath MG. Диабет тип 1: етиология, имунология и терапевтични стратегии. Физиологични прегледи. 2011; 91 (1): 79-118. DOI: http://dx.doi.org/10.1152/physrev.00003.2010

4. Саудек ​​CD, WC Duckworth, Giobbie-Hurder A, Henderson WG, Хенри Р.Р., Кели Д.Е., Еделман С.В., Зиве Ф.Ю., Адлер Р.А., Андерсън Дж., Имплантируема инсулинова помпа срещу многодозова инсулин за неинсулинозависим захарен диабет: рандомизирано клинично изпитване. Департамент по въпросите на ветераните Имплантирана група за изследване на инсулинова помпа. JAMA: списание на Американската медицинска асоциация. 1996; 276 (16): 1322-1327. DOI: http://dx.doi.org/10.1001/jama.1996.03540160044031

5. Ichii H, Ricordi C. Текущо състояние на трансплантацията на островни клетки. Вестник на хепато-жлъчната хирургия на панкреаса. 2009; 16 (2): 101-112.

6. Venturini M, Angeli E, Maffi P, Fiorina P, Bertuzzi F, Salvioni M, et al. Техника, усложнения и терапевтичен диабет на остров Сесилия: USRadiology. 2005; 234 (2): 617-624. DOI: http://dx.doi.org/10.1148/radiol.2342031356

7. Бартън Ф.Б., Рикълс МР, Алехандро Р, Нея

BJ, Wease S, Naziruddin B, et al. Подобряване на резултатите от трансплантацията на клинични острови:

1999-2010. Грижа за диабета. 2012; 35 (7): 1436-1445. DOI: http://dx.doi.org/10.2337/dc12-0063

8. Shapiro AMJ. Състояние на клиничната трансплантация на островчета и нови протоколи за имуносупресия. Текущи отчети за диабета. 2011; 11 (5): 345-354. DOI: http://dx.doi.org/10.1007/s11892-011-0217-8

9. Bertuzzi F, Verzaro R, Provenzano V, Ricordi C.

Чуплив захарен диабет тип 1. Текуща медицинска химия. 2007; 14 (16): 1739-1744. DOI: http://dx.doi.org/10.2174/092986707781058922.

Захарен диабет. 2013; (3): 11-20

10. Teta M, Long SY, Wartschow LM, Rankin MM, Kush-ner JA. Много бавен оборот от (3-клетки в възрастни мишки на възрастен. Diabetes. 2005; 54 (9): 2557-2567. DOI: http://dx.doi.org/10.2337/diabetes.54.9.2557

11. Батлер PC, Meier JJ, Butler AE, Bhushan A. Репликацията на клетките. Природна клинична практика Ендокринология Краен метаболизъм. 2007; 3 (11): 758-768. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/ncpendmet0647

12. Lipsett M, Aikin R, Castellarin М, Hanley S, Jamal AM, Laganiere S, et al. Неогенеза на островчета: Диабет. Международен журнал по биохимия Клетъчна биология. 2006; 38 (4): 498-503. DOI: http://dx.doi.org/10.1016Zj.biocel.2005.08.022

13. Meier JJ, Butler AE, Saisho Y, Monchamp T, Galasso R,

Bhushan A, et al. р-клетъчна репликация, заместваща постнаталната експанзия на р-клетъчната маса при хората. Диабет. 2008; 57 (6): 1584-1594. DOI: http://dx.doi.org/10.2337/db07-1369

14. Parsons JA, Bartke A, Sorenson RL. Трансгенни и хипофизни мишки с експресиращ хормон на растежа, ефект на лактогенни хормони. Ендокринология. 1995; 136 (5): 2013-2021. DOI: http://dx.doi.org/10.1210/en.136.5.2013.

15. Gupta RK, Gao N, Gorski RK, White P, Hardy OT, Rafiq K, et al. Разширяването на масата на възрастните бета-клетки в отговор на повишеното метаболитно търсене зависи от HNF-4 алфа.

Гени и развитие. 2007; 21 (7): 756-769. DOI: http://dx.doi.org/10.1101/gad.1535507

16. Willcox A, Richardson SJ, Bone AJ, Foulis AK, Morgan NG. Доказателство за повишена пролиферация на островни клетки при пациенти с неотдавнашен диабет тип 1. Diabetologia. 2010; 53 (9): 2020-2028. DOI: http://dx.doi.org/10.1007/s00125-010-1817-6

17. Pipeleers D, Ling Z. Панкреатични бета клетки при инсулинозависим диабет. Отзиви за диабет / метаболизъм. 1992; 8 (3): 209-227. DOI: http://dx.doi.org/10.1002/dmr.5610080303

18. Keenan HA, Sun JK, Levine J, Doria A, Aiello LP, Eisenbarth G, et al. Производство на остатъчен инсулин и панкреатичен п-клетъчен оборот след 50 години диабет. Диабет. 2010; 59 (11): 2846-2853. DOI: http://dx.doi.org/10.2337/db10-0676.

19. Dor Y, Brown J, Martinez OI, Melton DA. Възрастни панкреасни бета-клетки се образуват по-скоро чрез само-дублиране, отколкото чрез диференциация на стволови клетки. Nature. 2004; 429 (6987): 41-46. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/nature02520

20. Nir T, Melton DA, Dor Y. Възстановяване от диабет при мишки с регенерация на бета-клетки. Вестник на клиничното изследване. 2007; 117 (9): 2553-2561. DOI: http://dx.doi.org/10.1172/JCI32959

21. Козар-Кастелано I, Такене К. К., Боттино Р, Баламуруган АН, Стюарт А. Ф. Индукция на р-клетъчна пролиферация и фосфорилиране на ретинобластом протеин в плъх и циан-D1. Диабет. 2004; 53 (1): 149-159. DOI: http://dx.doi.org/10.2337/diabetes.53.1J49.

22. Fiaschi-Taesch NM, Salim F, Kleinberger J, Troxell R, Cozar-Castellano I, Selk K, et al. Индукция на човешката р-клетъчна пролиферация и присаждане с помощта на единична регулаторна молекула G1 / S, cdk6. Диабет. 2010; 59 (8): 1926-1936. DOI: http://dx.doi.org/10.2337/db09-1776

23. Nauck MA, Kleine N, 0rskov C, Holst JJ, Willms B,

Creutzfeldt W. Нормализиране на хипергликемията на гладно от екзогенен глюкагон-подобен пептид 1 (7-36 амид) в тип 2 (неинсулин-зависим) диа-

бетични пациенти. Diabetologia. 1993; 36 (8): 741-744. DOI: http://dx.doi.org/10.1007/BF00401145

24. Парнауд Г, Боско Д, Берни Т, Пату Ф, Кер-Конте Дж,

Donath MY, et al. Пролиферация на сортирани човешки и плъши бета клетки. Diabetologia. 2008; 51 (1): 91-100. DOI: http://dx.doi.org/10.1007/s00125-007-0855-1

25. Rachman J, Barrow BA, Levy JC, Turner RC. Глюкагон-подобен пептид-1 глюкагон-подобен пептид-1 (GLP-1) в субекти с NIDDM. Diabetologia. 1997; 40 (2): 205-211. DOI: http://dx.doi.org/10.1007/s001250050664

26. Yi P, Park J-S, Melton Douglas A. Бетатрофин:

Хормон, който контролира панкреатичната 2 клетъчна пролиферация. Cell. 2013; 153 (4): 747-758. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2013.04.008

27. Gazdar AF, Chick WL, Oie HK, Sims HL, King DL,

Weir GC, et al. Непрекъснати, клонални, инсулин- и соматостатин-секретиращи клетъчни линии се установяват от клетъчен тумор на трансплантируеми островни островчета. Известия на Националната академия на науките. 1980; 77 (6): 3519-3523. DOI: http://dx.doi.org/10.1073/pnas.77.6.3519

28. Hohmeier HE, Newgard CB. Клетъчни линии, получени от панкреатични островчета. Молекулярна и клетъчна ендокринология. 2004; 228 (1-2): 121-128. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.mce.2004.04.017

29. Levine F, Wang S, Beattie GM, et al. Развитие на клетъчна линия от човешкия плодов панкреас. Процедури за трансплантация. 1995; 27: 3410.

30. Dufayet de la Tour D, Halvorsen Т, Demeterco C, Tyr-berg В, Itkin-Ansari P, Loy M, et al. p-клетъчна диференциация от човешка панкреатична клетъчна линия in vitro и in vivo. Молекулярна ендокринология. 2001; 15 (3): 476-483. DOI: http://dx.doi.org/10.1210/me.15.3.476

31. Нарушима М, Кобаяши Н., Окицу Т, Танака Й,

Li S-A, Chen Y, et al. Линия на човешка бета-клетка за трансплантационна терапия за контрол на диабет тип 1. Nature Biotechnology. 2005; 23 (10): 1274-1282. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/nbt1145

32. Ravassard Р, Hazhouz Y, Pechberty S, Bricout-Neveu Е, Armanet М, Czernichow Р, et al. Генетично модифицирана човешка панкреатична бета клетъчна линия, проявяваща глюкозо-индуцируема инсулинова секреция. Вестник на клиничното изследване. 2011; 121 (9): 3589-3597. DOI: http://dx.doi.org/10.1172/JCI58447

33. Butler AE, Cao-Minh L, Galasso R, Rizza RA, Corradin A, Cobelli C, et al. Клетъчни промени в човешката бременност. Diabetologia. 2010; 53 (10): 2167-2176. DOI: http://dx.doi.org/10.1007/s00125-010-1809-6

34. Jones PM, Courtney ML, Burns CJ, Persaud SJ.

Лечение на диабет, основано на клетки. Откриване на наркотици днес. 2008; 13 (19-20): 888-893. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.drudis.2008.06.014

35. Bonner-Weir S, Baxter LA, Schuppin GT, Smith FE. Втори път за регенерация на екзокринния и ендокринния панкреас. Възможно е рекапитулация на ембрионалното развитие. Диабет. 1993; 42 (12): 1715-1720.

36. Li WC, Rukstalis JM, Nishimura W, Chipashvili V, Habener JF, Sharma A, et al. Активиране на прогениторни клетки, получени от панкреатичен канал, при регенерация на панкреаса при възрастни плъхове.

Вестник на клетъчната наука. 2010; 123 (Pt 16): 2792-2802. DOI: http://dx.doi.org/10.1242/jcs.065268

37. Bonner-Weir S, Li WC, Ouziel-Yahalom L, Guo L, Weir GC, Sharma A. Бета-клетъчен растеж и регенерация: репликацията е

Захарен диабет. 2013; (3): 11-20

само част от историята. Диабет. 2010; 59 (10): 2340-2348. DOI: http://dx.doi.org/10.2337/db10-0084

38. Регенерация на Gianani R. Beta клетки в човешки панкреас.

Семинари по имунопатология. 2011; 33 (1): 23-27. DOI: http://dx.doi.org/10.1007/s00281-010-0235-7

39. Collombat Р, Xu X, Ravassard Р, Sosa-Pineda В, Dussaud S, Billestrup N, et al. Ектопичната експресия на Pax4 в панкреаса на мишка превръща прогениторните клетки в алфа и впоследствие бета клетки. Cell. 2009; 138 (3): 449-462. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2009.05.035

40. Thorel F, Nepote V, Avril I, Kohno K, Desgraz R, Chera S, et al. Превръщане на възрастни клетки в бета-клетки след крайна загуба на бета-клетки. Nature. 2010; 464 (7292): 1149-1154. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/nature08894

41. Saisho Y, Manesso E, Butler AE, Galasso R, Kavanagh K,

Flynn M, et al. Текущ оборот на бета-клетките за възрастен Диабет. 2011; 60 (3): 848-856. DOI: http://dx.doi.org/10.2337/db09-1368

42. Klymiuk N, Aigner B, Brem G, Wolf E. Генетични организатори за ксенотрансплантация. Молекулярна репродукция и развитие. 2010; 77 (3): 209-221. DOI: http://dx.doi.org/10.1002/mrd.21127

43. Галили У, Шохет С.Б., Кобрин Е, Стюлц СЛ, Махер Б.А. Човекът, маймуните и маймуните от Стария свят се различават от другите бозайници в изразяването на алфа-галактозилови епитопи върху ядрени клетки. Вестник по биологична химия. 1988; 263 (33): 17755-17762.

44. Пациент С, Takeuchi Y, Weiss RA. Инфекция на човешки клетки от ендогенен ретровирус на прасета. Медицина на природата. 1997; 3 (3): 282-286.

45. Wilson CA, Wong S, Muller J, Davidson CE, Rose TM, Burd P. Ретровирус тип C, освободен от Първичния прашец. Вестник по вирусология. 1998; 72 (4): 3082-3087.

46. ​​van der Laan LJW, Lockey C, Griffeth BC, Frasier FS, Wilson CA, Onions DE, et al. Инфекция чрез свински ендогенен ретровирус след остър ксенотрансплантация в SCID мишки. Nature. 2000; 407 (6800): 90-94.

47. McKenzie IFC, Koulmanda M, Mandel TE, Sandrin MS.

Рязане: Ксенотрансплантатите на прасета са чувствителни към анти-прасе, но не и на гала (1,3) Gal антитела плюс добавка в Galo / o мишки. Вестник на имунологията. 1998; 161 (10): 5116-5119.

48. Ван дер Винд, DJ Боттино Р, Касу А, Campanile N,

Smetanka C, He J, et al. Дългосрочно контролирана нормогликомия в диабетични нечовешки примати след трансплантация с hCD46 трансгенни свински островчета. Американски вестник за трансплантация. 2009; 9 (12): 2716-2726.

49. Klymiuk N, van Buerck L, Bahr A, Оферти М, Kessler В, Wuen-sch A, et al. Ксенографски клъстери от островни клетки от трансгенни прасета INSLEA29Y. Диабет. 2012; 61 (6): 1527-1532. DOI: http://dx.doi.org/10.2337/db11-1325

50. Ekser В, Ezzelarab M, Hara H, ван дер Windt DJ, Wijk-strom М, Bottino R, et al. Клинична ксенотрансплантация: следващата медицинска революция? The Lancet.379 (9816): 672-683. DOI: http://dx.doi.org/http://dx.doi.org/10.1016/S0140-6736(11)61091-X

51. Hering BJ, Wijkstrom M, Graham ML, Hardstedt M, Aas-heim TC, Jie T, et al. Продължителна реверсия на диабета след интрапортална ксенотрансплантация на диви тип свински островчета в имуносупресирани нечовешки примати. Медицина на природата. 2006; 12 (3): 301-303. DOI: http://dx.doi.org/http:// www.nature.com/nm/journal/v12/n3/suppinfo/nm1369_S1.html

52. Rayat GR, Rajotte RV, Ao Z, Korbutt GS. Микрокапсулиране на новородени прасета: защита на човешки антитела / комплемент-медиирана цитолиза in vitro и дългосрочно обръщане на диабета. Трансплантацията. 2000; 69 (6): 1084-1090.

53. Dufrane D, Goebbels RM, Gianello P. Алгинат до 6 месеца без имуносупресия. Трансплантацията. 2010; 90 (10): 1054-1062. DOI: http://dx.doi.org/10.1097/TP.0b013e3181f6e267

54. Elliott RB, Escobar L, Tan PL, Muzina M, Zwain S, Buchanan C. Живи капсулирани свински островчета от пациент с диабет тип 1 9,5 години след ксенотрансплантация. Ксенотранплантация. 2007; 14 (2): 157-161. DOI: http://dx.doi.org/10.1111/j.1399-3089.2007.00384.x

55. Слънце Y, Ма X, Джоу Д, Вацек I, Сън АМ. Нормализиране на диабета при спонтанно диабетични cynomo-logus маймуни чрез ксенотранспланти на микрокапсулирани свински островчета без имуносупресия. Вестник на клиничното изследване. 1996; 98 (6): 1417-1422. DOI: http://dx.doi.org/10.1172/JCI1 18929

56. Takeuchi Y, Fishman J. Дълъг живот с или без PERV. Ксенотранплантация. 2010; 17 (6): 429-430. DOI: http://dx.doi.org/10.1111/j.1399-3089.2010.00614.x

57. Langford GA, Galbraith D, Whittam AJ, McEwan P, Fernandez-Suarez XM, Black J, et al. In vivo анализ на свински ендогенна експресия на ретровирус в трансгенни прасета. Трансплантацията. 2001; 72 (12): 1996-2000.

58. Elliott RB, Escobar L, Garkavenko O, et al. Няма данни за инфекция с свински ендогенен ретровирус в реципиенти на капсулирани ксенотранспланти на прасета. Клетъчна трансплантация. 2000; 9 (6): 895-901.

59. Свински ендогенни ретровируси. Ксенотранплантация. 2001; 8 (2): 125-135. DOI: http://dx.doi.org/10.1034/j.1399-3089.2001.00080.x-i1

60. Soria B, Roche E, Berna G, Leon-Quinto T, Reig JA, Martin F. Инсулин-секретиращите клетки, получени от ембрионални стволови клетки, нормализират гликемията при стрептозотоцин-индуцирани диабетни мишки. Диабет. 2000; 49 (2): 157-162. DOI: http://dx.doi.org/10.2337/diabetes.49.2J57

61. Lumelsky N, Blondel O, Laeng P, Velasco I, Ravin R,

Маккей Р. Диференциране на ембрионални стволови клетки към инсулин-секретиращи структури. Science. 2001; 292 (5520): 1389-1394. DOI: http://dx.doi.org/10.1126/science.1058866

62. D'Amour KA, Agulnick AD, Eliazer S, Kelly OG,

Kroon E, Baetge EE. Ефективна диференциация на човешки ембрионални стволови клетки към дефинитивна ендодерма. Nature Biotechnology. 2005; 23 (12): 1534-1541. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/nbt1163

63. D'Amour KA, Bang AG, Eliazer S, Kelly OG, Agulnick AD, Smart NG, et al. Производство на ендокринни клетки, експресиращи хормоните на панкреаса, от човешки ембрионални стволови клетки. Nature Biotechnology. 2006; 24 (11): 1392-1401. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/nbt1259

64. Jiang J, Au M, Lu K, Eshpeter A, Korbutt G, Fisk G, et al. Генериране на производни на инсулин клъстери от човешки ембрионални стволови клетки. Стволови клетки. 2007; 25 (8): 1940-1953. DOI: http://dx.doi.org/10.1634/stemcells.2006-0761

65. Jiang W, Shi Y, Zhao D, Chen S, Yong J, Zhang J, et al. In vitro получаване на инсулин-продуциращи клетки от човешки ембрионални стволови клетки. Клетъчни изследвания. 2007; 17 (4): 333-344. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/cr.2007.28

Захарен диабет. 2013; (3): 11-20

66. Chen S, Borowiak M, Fox JL, Maehr R, Osafune K,

Davidow L, et al. Малка молекула, която насочва диференциацията на човешките ЕСК към потомството на панкреаса.

Nature Chemical Biology. 2009; 5 (4): 258-265. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/nchembio.154

67. Kroon Е, Martinson LA, Kadoya К, Bang AG, Kelly OG, Elizerzer S, et al. Панкреатичната ендодерма, получена от човешки ембрионални стволови клетки, генерира глюкозо-отговорни инсулин-секретиращи клетки in vivo. Nature Biotechnology. 2008; 26 (4): 443-452. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/nbt1393

68. Schulz TC, Young HY, Agulnick AD, et al. (2012) Редица панкреатични предшественици на човешки ембрионални стволови клетки. PloS one 7: e37004.

69. Kelly OG, MY MY, Martinson LA, Kadoya K, Ostertag TM, Ross KG, et al. Човешки ембрионални стволови клетки. Nature Biotechnology. 2011; 29 (8): 750-756. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/nbt.1931

70. Jiang W, Sui X, Zhang D, Liu M, Ding M, Shi Y, et al.

CD24: нов повърхностен маркер за PDX1-положителни панкреасни прогенитори, получен от човешки ембрионални стволови клетки. Стволови клетки. 2011; 29 (4): 609-617. DOI: http://dx.doi.org/10.1002/stem.608

71. Бен-Дейвид U, Ган QF, Голан-Лев Т, Арора П, Янука О,

Oren YS, et al. Селективно елиминиране на човешки клетки от клетките на инхибитор на синтез на анаелин, открити в силно пропускателен екран. Клетъчни стволови клетки. 2013; 12 (2): 167-179. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2012.11.11.015

72. Osafune K, Caron L, Borowiak M, Martinez RJ, Fitzgerald CS, Sato Y, et al. Маркирани разлики в диференциацията на човешки ембрионални стволови клетъчни линии. Nature Biotechnology. 2008; 26 (3): 313-315. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/nbt1383

73. Takahashi K, Yamanaka S. Индукция на плурипотентни стволови клетки от фибрин-ембрионални и възрастни фибробластни култури чрез определени фактори. Cell. 2006; 126 (4): 663-676. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2006.07.024

74. Takahashi K, Tanabe K, Ohnuki M, Narita M, Ichi-saka T, Tomoda K, et al. Индукция на плурипотентни стволови клетки от възрастни човешки фибробласти чрез определени фактори. Cell. 2007; 131 (5): 861-872. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2007.11.0.019

75. Stadtfeld M, Hochedlinger K. Индуцирано плурипотенция: история, механизми и приложения. Гени и развитие. 2010; 24 (20): 2239-2263. DOI: http://dx.doi.org/10.1101/gad.1963910

Wu SM, Hochedlinger K. Оползотворяване на потенциала на плурипотентни стволови клетки за регенеративна медицина. Nature Cell Biology. 2011; 13 (5): 497-505. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/ncb0511-497

77. Tateishi K, He J, Taranova О, Liang G, D'Alessio AC,

Zhang Y. Генериране на инсулин-секретиращи островчета подобни от човешки кожни фибробласти. Вестник по биологична химия. 2008; 283 (46): 31601-31607. DOI: http://dx.doi.org/10.1074/jbc.M806597200

78. Zhang D, Jiang W, Liu М, Sui X, Yin X, Chen S, et al.

Високо ефективна диференциация на човешки клетки и iPS клетки в зрели панкреатични инсулин-продуциращи клетки. Клетъчни изследвания. 2009; 19 (4): 429-438. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/cr.2009.28

79. Alipio Z, Liao W, Roemer EJ, Waner M, Fink LM,

Ward DC, et al. Обръщане на хипергликемията при модели на диабетни мишки при използване на индуцирани плурипотентни стволови (iPS) -получени панкреатични бета-подобни клетки. Известия на Националната академия на науките на САЩ

на Америка. 2010; 107 (30): 13426-13431. DOI: http://dx.doi.org/10.1073/pnas.1007884107

80. Thatava T, Nelson TJ, Edukulla R, Sakuma T, Ohmine S,

Tonne JM, et al. Индолактам V / GLP-1-медиирана диференциация на човешки iPS клетки в глюкозо-чувствително инсулин-секретиращо потомство. Генна терапия. 2011; 18 (3): 283-293. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/gt.2010.145

81. Maehr R, Chen S, Snitow М, Ludwig T, Yagasaki L, Goland R, et al. Генериране на плурипотентни стволови клетки от пациенти с диабет тип 1. Производство на Съединените американски щати. 2009; 106 (37): 15768-15773. DOI: http://dx.doi.org/10.1073/pnas.0906894106

82. Bar-Nur O, Russ HA, Efrat S, Benvenisty N. Епигенетична памет и преференциална линейно-специфична диференциация на индуцирани плурипотентни стволови клетки, получени от човешки панкреасни островни бета клетки. Клетъчни стволови клетки. 2011; 9 (1): 17-23. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2011.06.06.007

83. Polo JM, Liu S, Figueroa МЕ, Kulalert W, Eminli S, Tan KY, et al. Молекулярният тип миши индуцирани плурипотентни стволови клетки.

Nature Biotechnology. 2010; 28 (8): 848-855. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/nbt.1667

84. Okano H, Nakamura M, Yoshida K, Okada Y, Tsuji O, Nori S, et al. Стъпки към безопасна клетъчна терапия чрез индуцирани плурипотентни стволови клетки. Изследване на циркулацията. 2013; 112 (3): 523-533. DOI: http://dx.doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.111.256149

85. Ichida JK, Blanchard J, Lam K, Son EY, Chung JE,

Egli D, et al. Малкомолекулен инхибитор на tgf-бета сигнализиране, заместващ sox2 при препрограмиране чрез индуциране на наног. Клетъчни стволови клетки. 2009; 5 (5): 491-503. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2009.09.09.012

86. Zhu S, Li W, Zhou H, Wei W, Ambasudhan R, Lin T, et al. Репрограмиране на човешки първични соматични клетки чрез OCT4 и химични съединения. Клетъчни стволови клетки. 2010; 7 (6): 651-655. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2010.11.11.015

Pellegrini S. (Pellegrini S.)

Сорди В. (Сорди В.) Пиемонти Л. (Piemonti L.)

Научноизследователски институт по диабет, болница "Сан Рафаеле", Милано, Италия, Университет на Инсубрия, Варезе, Италия

(Изследователски институт за диабет, Оспидале Сан Рафаеле, Милано, Италия, Universita degli Studi dell'Insubria, Варезе, Италия)

Изследователски институт по диабет, болница "Сан Рафаеле", Милано, Италия (Институт за изследване на диабета, Оспидале Сан Рафаеле, Милано, Италия)

Изследователски институт по диабет, болница "Сан Рафаеле", Милано, Италия (Институт за изследване на диабета, Оспидале Сан Рафаеле, Милано, Италия)